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Neurociencia
0 vistas • 3:09 min • July 8th, 2025
Tome una rebanada de cerebro de ratón que contenga el tálamo medial, o MT, que se proyecta a la corteza cingulada anterior, o ACC.
Asegure el corte en una cámara de matriz de electrodos múltiples perfundida con aCSF oxigenado para registrar señales eléctricas.
Coloque electrodos positivos y negativos y aplique estimulación de corriente continua, o DCS, generando un campo eléctrico a través de la rebanada.
Desactive la EDC y coloque un electrodo en el MT. Administre un estímulo para evocar potenciales de acción en las neuronas talámicas, desencadenando la liberación de neurotransmisores.
Los neurotransmisores desencadenan la afluencia de iones en las neuronas ACC y generan señales eléctricas, denominadas respuestas sinápticas evocadas por estimulación.
Reactivar la EDC para monitorear sus efectos sobre las respuestas sinápticas de ACC.
A continuación, desactive la EDC e introduzca medicamentos que induzcan convulsiones.
Los fármacos aumentan la excitabilidad neuronal, lo que hace que el estímulo talámico produzca ráfagas continuas de señales en el ACC, denominadas ataques epilépticos evocados.
Finalmente, reactivar la EDC para evaluar su efecto sobre las convulsiones midiendo la reducción de la amplitud y duración de las convulsiones.
En este procedimiento, asegure la generación de campos eléctricos uniformes haciendo pasar corrientes entre dos cables de plata paralelos recubiertos de cloruro de plata que se colocan dentro de la cámara MEA. Si no hay problemas, el DCS debe permanecer entre 0,5 y 2 miliamperios.
A continuación, apague la EDC y estimule el tálamo con un electrodo de tungsteno. Para obtener respuestas sinápticas máximas en ACC, registre de 10 a 20 respuestas y promediarlas. Luego, encienda la EDC y estimule el tálamo simultáneamente. Evaluar los cambios de amplitud de la respuesta ACC evocada por la estimulación talámica durante la EDC.
Ahora, apague el DCS. Agregue 250 micromolares de 4-AP y 5 micromolares bicuculinas a la solución de perfusión y espere de dos a tres horas. Si los medicamentos afectan el corte del cerebro, el corte debería producir respuestas convulsivas corticales. Posteriormente, recopile de 10 a 20 respuestas corticales cinguladas anteriores y mida la amplitud y duración de las respuestas convulsivas corticales evocadas eléctricamente.
A continuación, encienda la EDC y estimule el tálamo simultáneamente. Evaluar los cambios en la amplitud y duración de las respuestas convulsivas corticales evocadas durante la aplicación de EDC. Después de eso, reemplace la solución de perfusión con aCSF nuevo para eliminar los medicamentos.