Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:41 min. • July 8th, 2025
Comience con un dispositivo microfluídico compartimentado recubierto de laminina colocado sobre una matriz de electrodos múltiples con patrón o MEA.
El dispositivo lleva neuronas glutamatérgicas corticales derivadas de iPSC cultivadas adheridas a microelectrodos de un MEA.
Estas neuronas se comunican a través de señales eléctricas. Registre estas señales como actividad neuronal de referencia.
A continuación, siembre el dispositivo con células de glioma pediátricas de alto grado ricas en glutamato, un tipo de célula tumoral cerebral, e incube.
Con el tiempo, las células de glioma ingresan al canal y se unen, estableciendo el cocultivo. Más tarde, las células del glioma liberan glutamato, un neurotransmisor excitador.
El glutamato liberado interactúa con los receptores neuronales, lo que lleva a una afluencia de iones de calcio y sodio que provoca la despolarización de la membrana neuronal.
Esto induce la excitabilidad neuronal y mejora la actividad neuronal.
Vuelva a registrar las señales eléctricas y un aumento significativo después del cocultivo indica una interacción exitosa entre neuronas y células de glioma.
Siembre las células tripsinizadas UW479 y BT35 sobre las neuronas glutamatérgicas adherentes maduras en cada dispositivo microfluídico dedicado. Mantenga los cocultivos durante dos días en un ambiente controlado a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono con neurona glutamatérgica D11 y medio en adelante.
Cuente las células de glioma de alto grado pediátricas utilizando las imágenes microscópicas analizadas con el software de análisis de imágenes para evaluar su viabilidad y calcular el porcentaje de células. Coloque el MFD en el dispositivo de registro y use un software disponible comercialmente para realizar el registro electrofisiológico de las neuronas glutamatérgicas el día 21.
Antes de sembrar células de glioma pediátricas de alto grado, realizar un segundo registro electrofisiológico de las neuronas glutamatérgicas diferenciadas cultivadas como control, en paralelo al cocultivo.