Evaluación de los efectos de las toxinas en el desarrollo de redes neuronales de embriones de pollo mediante matrices de electrodos múltiples

Comience con cultivos adherentes de neuronas de pollito embrionarias tempranas en matrices de electrodos multielectrodos recubiertas de matriz extracelular, o MEA.

La base de los MEA contiene rejillas de pequeños electrodos que registran la actividad neuronal.

En el cultivo de prueba, las neuronas crecen en presencia de una toxina, mientras que en el cultivo de control, las neuronas crecen sin la toxina.

Antes de grabar, reemplace los medios en ambos MEA con medios libres de toxinas e incube brevemente.

A continuación, coloque un MEA en el dispositivo de grabación y comience a grabar.

Las neuronas se comunican a través de impulsos eléctricos llamados potenciales de acción o picos.

En la sinapsis, estos potenciales de acción desencadenan la liberación de neurotransmisores, propagando la señal a la siguiente neurona.

Los electrodos MEA registran los picos generados por las neuronas conectadas sinápticamente.

En la condición de control, la red neuronal madura sana exhibe una actividad de picos sincrónica.

En el cultivo de prueba, la reducción de los picos y la sincronía sugieren una maduración alterada de la red neuronal causada por la toxina.

El día de la adquisición, reemplace el medio de cultivo con medio neurobasal fresco y devuelva las matrices a la incubadora de CO₂ durante un mínimo de dos horas antes de grabar. Inicie el software de grabación y ajuste la temperatura de la matriz de electrodos múltiples a 37 grados centígrados haciendo clic en el icono de temperatura. Establezca los parámetros de adquisición seleccionando secuencias en el panel de la ventana izquierda y haciendo clic con el botón derecho en el icono de la musa. A continuación, seleccione Agregar procesamiento y detector de picos y haga clic en Aceptar en la ventana emergente. Spike Detector 6 de STD aparecerá debajo del nombre del archivo.

A continuación, haga clic con el botón derecho en el detector de picos, seleccione Agregar procesamiento y detector de ráfagas y haga clic en Aceptar en la ventana emergente. Burst Detector ISI aparecerá debajo del icono de muse. Luego haga clic derecho en Burst Detector, seleccione Agregar compilador de procesamiento y estadísticas neuronales. En la ventana emergente, asegúrese de que Encabezado de archivo, Estadísticas de pozo agregadas y Sincronía estén seleccionados. Haga clic en Aceptar.

El compilador de estadísticas aparecerá a continuación. Haga clic en el icono del reloj en la parte inferior de la pantalla y cambie la información en la sección Configuración para grabar cada 5.1 minutos y grabar durante cinco minutos. Esto se iniciará inmediatamente y se ejecutará una vez. Después de recuperar la matriz de electrodos múltiples de la incubadora, colóquela en la unidad de registro y bloquéela en su lugar. Comience a grabar la actividad de la red haciendo clic en Iniciar grabación en la sección de grabación programada.