Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:58 min. • July 8th, 2025
Tome un cultivo celular que contenga células cancerosas neuronales adheridas a un cubreobjetos y manténgalo en condiciones frías.
Retire el medio de cultivo y lave repetidamente las células con tampón de fosfato frío para eliminar el medio residual.
Agregue un tampón de lisis que contenga una baja concentración de detergente no iónico e inhibidores de proteasa.
El detergente no iónico interrumpe la membrana celular para iniciar la lisis.
Mientras tanto, los inhibidores de la proteasa bloquean las enzimas proteolíticas celulares, protegiendo a las proteínas de la degradación enzimática.
A continuación, use un raspador de células para desalojar las células parcialmente lisadas del cubreobjetos.
Transfiera el contenido a un tubo que contenga el tampón de lisis.
En condiciones de frío, use un homogeneizador para lisar mecánicamente las células, asegurando la lisis celular completa y la liberación de proteínas.
Centrifugar el lisado celular.
Recoja el sobrenadante en un tubo nuevo.
Las proteínas extraídas de las células tumorales neuronales ahora están listas para un análisis adicional.
Para la validación de la expresión de proteínas, 48 horas después de la transfección, coloque las placas de cultivo en hielo y lave las células dos veces con PBS. Trate las células en cada plato con 200 a 400 microlitros de tampón de lisis y use un raspador de células para quitar las células de los cubreobjetos.
Transfiera las células separadas de cada placa a tubos de microcentrífuga individuales y disocie aún más las células con un homogeneizador bajo hielo. Después de un minuto, granular las piezas celulares homogeneizadas por centrifugación.