Inmunotinción de fluorescencia de neuronas del hipocampo de rata dentro de un chip microfluídico

Tome un chip microfluídico que contenga neuronas del hipocampo de rata.

El chip presenta reservorios somáticos y axonales, con compartimentos divididos por microsurcos, compartimentando efectivamente las neuronas y aislando las regiones somáticas y axonales.

Retire el medio y agregue formaldehído. Incubar para fijar las neuronas y preservar su estructura.

Retire el exceso de formaldehído y lave con tampón. Luego, agregue un detergente para permeabilizar las neuronas.

Reemplace el detergente con una solución de bloqueo para bloquear los sitios de unión no específicos.

Retire la solución de bloqueo e incube con anticuerpos primarios que se unen a marcadores sinápticos neuronales específicos, que son proteínas integrales de membrana en las vesículas sinápticas.

Retire los anticuerpos no unidos y lave con tampón.

Incubar con anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo que se unen a los anticuerpos primarios dirigidos a marcadores sinápticos.

Retire los anticuerpos secundarios no unidos y lave con tampón.

Bajo un microscopio confocal, obtenga una imagen del chip para visualizar los marcadores sinápticos neuronales fluorescentes.

Para comenzar la inmunotinción de fluorescencia, retir