Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:45 min. • July 8th, 2025
Tome neuronas corticales primarias de rata en un plato con fondo de vidrio recubierto de polímero.
Fije las neuronas con paraformaldehído para preservar las estructuras celulares.
Lava el exceso de paraformaldehído.
Añadir un detergente no iónico para permeabilizar las células.
Trate las células con una tinción fluorescente verde dirigida a la proteína estructural actina filamentosa o F-actina.
Elimina el exceso de mancha.
Aplicar un agente bloqueador para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Incubar con anticuerpos primarios que se dirigen a las proteínas dendríticas.
Retire los anticuerpos no unidos.
Agregue anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo rojo para unirse a los anticuerpos primarios. Lave el exceso de anticuerpos.
Aplique un tinte fluorescente para teñir los núcleos. Retire el tinte desligado.
Agregue un reactivo antidecoloración para evitar el fotoblanqueo de fluoróforos.
Usando microscopía fluorescente, capture imágenes de las neuronas.
Identifique una región rica en F-actina dentro de la dendrita marcada.
Usando software, cuente los puntos o manchas de F-actina y trace manualmente la longitud de la dendrita para calcular la densidad de F-actina.
Fi
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