Modelado de la lesión neuronal en neuronas cerebelosas primarias de ratón

Comience con un cultivo de neuronas granulares cerebelosas primarias de ratón.

Agregue altas concentraciones de N-metil-D-aspartato, o NMDA, un agonista del receptor de neurotransmisores excitadores, y glicina, un coagonista. Incubar la cultura.

NMDA y glicina se unen a sus respectivos sitios en los receptores NMDA, lo que lleva a una sobreestimulación y causa una afluencia masiva de iones de calcio.

El aumento de calcio intracelular activa las fosfolipasas dependientes de calcio, que degradan los fosfolípidos de la membrana celular, lo que resulta en daño a la membrana.

Además, el calcio intracelular activa proteasas que degradan las proteínas celulares.

Los niveles elevados de calcio también inducen estrés mitocondrial y fragmentación, lo que lleva a la liberación de especies reactivas de oxígeno, o ROS, y causa estrés oxidativo.

Además, el calcio intracelular activa las ADNasas, que, junto con las ROS, causan daño en el ADN, lo que finalmente resulta en la muerte neuronal.

Reemplace el medio con medio fresco sin NMDA y glicina para detener la cascada de señalización.

El modelo de lesión neuronal inducida por NMDA está listo para un análisis más detallado.

Para inducir excitotoxicidad neuronal con NMDA, después de siete días in vitro, trate las neuronas granulares cerebelosas con 100 micromolares de NMDA y 10 micromolares de glicina durante una hora. Luego, reemplace el medio con medio acondicionado de los cultivos paralelos sin tratamiento. Esta concentración da como resultado una muerte celular del 50% a las 24 horas posteriores al tratamiento.