Aislamiento de fibrillas de amiloide a partir de extracto de tejido cerebral

Tome un extracto de tejido cerebral de ratón que contenga proteínas no amiloides y fibrillas amiloides, un agregado de proteínas insoluble.

Agregue sacarosa sólida y mezcle, aumentando la densidad de la solución.

Transfiéralo y centrifugue para separar las proteínas más densas de los desechos.

Deseche el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo en un tampón de mayor concentración de sacarosa, mezcle y centrifuge.

Recoja la capa superior que contiene algunas fibrillas amiloides en un tubo nuevo, agregue un tampón de lavado y mezcle.

Ahora, deseche la capa intermedia y transfiera el gránulo enriquecido con fibrillas amiloides al tubo que contiene la fracción de la capa superior para un aislamiento máximo.

Centrifugar las fracciones combinadas y desechar el sobrenadante. Agregue un tampón de digestión e incube para degradar exclusivamente las proteínas no amiloides.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante. Lave el gránulo para eliminar las proteínas residuales digeridas.

Vuelva a suspender el gránulo en un tampón de solubilización a base de sacarosa que contenga detergente que solubilice las proteínas no amiloides restantes.

Centrifugar, eliminar el sobrenadante y volver a suspender