Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:59 min. • July 8th, 2025
Tome una suspensión de citomegalovirus murino, modificado genéticamente para expresar una proteína fluorescente verde mejorada, lo que permite la visualización.
Cargue la suspensión en una jeringa con una aguja adjunta.
A continuación, anestesia a un cachorro de ratón colocándolo en hielo.
Identifique el lugar de la inyección en la cabeza del cachorro.
Inserte la aguja perpendicular a la superficie del cráneo hasta que llegue al ventrículo lateral, una cavidad llena de líquido cefalorraquídeo o LCR en el cerebro.
Inyecte la suspensión en el ventrículo lateral.
Deja que el cachorro se recupere.
El virus inyectado circula a través del LCR ventricular, llegando a las células ependimarias de la zona marginal y a las células epiteliales del plexo coroideo.
El virus se adhiere a los receptores de superficie de estas células, internaliza, se replica y se propaga de célula a célula, estableciendo una infección aguda en el plexo coroideo, el área marginal y la zona subventricular.
Comience esterilizando una jeringa de 10 microlitros y una aguja de calibre 27 con alcohol al 70%. Luego, cargue 5 microlitros de solución de inyección de citomegalovirus murino o microperlas fluorescentes en la aguja tirando con cuidado del émbolo de la jeringa.
Después de anestesiar e inmovilizar a un ratón neonatal P0.5 colocándolo en hielo durante tres o cuatro minutos, use el método de respuesta de pellizco del dedo del pie para determinar la profundidad de la anestesia. Marque el sitio de inyección en el ratón anestesiado con un bolígrafo de laboratorio no tóxico en un lugar aproximadamente de 0,7 a 1,0 milímetros lateral a la sutura sagital y de 0,7 a 1,0 milímetros caudal del bregma neonatal. Este diagrama muestra el sitio con más detalle.
Como referencia, marque a 2 milímetros de la punta de la aguja con un marcador no tóxico. A continuación, inserte la aguja a 2 milímetros de profundidad, perpendicular a la superficie del cráneo en el sitio de inyección marcado. Luego, inyecte lentamente 5 microlitros de citomegalovirus murino en el ventrículo lateral sin abrir el cuero cabelludo.
En otro grupo de ratones, inyecte una solución de 5 microlitros que contenga microperlas fluorescentes por el mismo método. Después de la inyección, deje que la aguja permanezca en su lugar durante 10 a 20 segundos para evitar el reflujo. Luego, retire lentamente la aguja. Deje que los animales inyectados se recuperen durante 5 a 10 minutos en un recipiente tibio hasta que se restablezca el movimiento y la capacidad de respuesta general.