Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:19 min. • July 8th, 2025
Fije un inserto de cultivo de tres compartimentos en una placa recubierta de polímero para la fijación de células.
Invierta el plato, marque el compartimento central y vuelva a orientarlo. Agregue un medio que contenga interneuronas a este compartimento.
Agregue un medio que contenga células endoteliales periventriculares humanas, o PVEC, células de los vasos cerebrales, a uno de los compartimentos externos.
En otro compartimento externo, agregue un medio que contenga células endoteliales no periventriculares como control.
Agregue un medio de cocultivo al plato para evitar que el polímero se seque. Incubar para la adherencia celular.
Desmonte el inserto, creando parches rectangulares de celdas con pequeños espacios libres de celdas entre cada tipo de celda.
Refresque con el medio de cocultivo e incube.
Las células endoteliales hacen que las interneuronas migren a espacios libres de células.
Mientras tanto, los PVEC liberan atrayentes químicos que mejoran la migración de las interneuronas hacia el parche que contiene PVEC.
Una mayor migración de interneuronas hacia el parche PVEC que el parche de células de control confirma la respuesta de las interneuronas a las señales quimioatractivas de los PVEC.
Para realizar el ensayo de quimioatracción, coloque un inserto de cultivo de tres pocillos en el centro de una placa de 35 milímetros recubierta de poli-L-ornitina y laminina. Dé la vuelta al plato y marque el límite alrededor del compartimento central del inserto con un marcador permanente con punta ultrafina.
Semilla 30.000 interneuronas GABAérgicas en 70 microlitros de medio neuronal en el compartimento medio. Luego, siembre 10,000 células endoteliales periventriculares y 10,000 células endoteliales de control en 70 microlitros de su medio respectivo en los dos compartimentos externos.
Agregue 1 mililitro de medio de cocultivo a lo largo del costado del plato para evitar que el recubrimiento del plato se seque. Después de 48 horas, retire el inserto e incube las células a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono durante 36 horas.