Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:08 min. • July 8th, 2025
Tome secciones fijas de organoides cerebelosos que comprenden distintos tipos de neuronas cerebelosas.
Lave las secciones en tampón para eliminar los medios de inclusión residuales.
Incubar en glicina para bloquear la fijación de sitios reactivos residuales, reduciendo la unión inespecífica durante la inmunotinción.
Agregue un detergente no iónico para permeabilizar las células.
Lavar con tampón, eliminando el exceso de detergente.
Ahora, seca el portaobjetos. Transfiéralo a un plato de inmunotinción con papel empapado en tampón para evitar que el tejido se seque.
Aplique una solución de bloqueo que se une a sitios no específicos en las neuronas.
Retire la solución de bloqueo. Incubar con anticuerpos primarios, que se unen a los antígenos diana dentro de las neuronas cerebelosas.
Lavar con tampón, eliminando los anticuerpos no unidos.
Incubar con anticuerpos secundarios unidos a fluoróforos para unirse a anticuerpos primarios unidos a antígenos.
Luego, lave con tampón, eliminando los anticuerpos no unidos.
Agrega un tinte para teñir los núcleos celulares.
Usando microscopía de fluorescencia, visualice marcadores expresados en neuronas cerebelosas, lo que indica la maduración de los
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