Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:47 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga organoides cerebrales humanos en un medio de inducción neural.
Los organoides contienen células madre, células gliales radiales, células progenitoras neurales o NPC y neuronas dispuestas en un patrón radial llamado roseta, imitando el cerebro en desarrollo.
Retire el medio y lave los organoides con un tampón.
Agregue el virus del Zika suspendido en un tampón a los pocillos de prueba y solo tampón a los pocillos de control.
Incubar, permitiendo que el virus se una a sus receptores en los NPC y se internalice.
Lave para eliminar los virus no internalizados, luego agregue medio de inducción neuronal fresco e incube.
Los virus internalizados utilizan la maquinaria de la célula huésped para formar nuevas partículas virales.
La multiplicación viral desencadena una respuesta de estrés celular que induce la apoptosis, reduciendo el número de NPC disponibles para el desarrollo de organoides.
Con el tiempo, los organoides infectados exhiben un tamaño reducido y una morfología alterada, lo que refleja un desarrollo cerebral anormal en humanos infectados por el virus del Zika.
Lleve la solución salina equilibrada 1X de Earle, 1X PBS y el medio de inducción neural a 37 grados Celsius en un baño de agua caliente. A continuación, diluya el virus del Zika de una concentración conocida en la solución de 1X Earle para la multiplicidad objetivo de la infección, que generalmente está entre 0.1 y 10. Con una pipeta P200, retire con cuidado todo el medio de cada organoide y luego lave rápidamente los organoides con 200 microlitros de PBS 1X tibio.
Al retirar el medio de cada pocillo, es fundamental que no se toque el organoide ni se succiona en la pipeta. Esto puede causar daños irreparables al organoide. Si esto sucede, es mejor desechar el organoide.
A continuación, retire con cuidado todo el líquido restante de cada pocillo de organoides con una pipeta P200 de un solo canal. Luego, agregue rápidamente 50 microlitros de 1x solución de Earle para una infección simulada o solución del virus Zika a cada pocillo. Asegúrese de que cada organoide esté completamente sumergido. Cuando termine, vuelva a colocar el plato en una incubadora a 37 grados centígrados durante dos horas.
Después de que se completa una exposición viral. Lave cada pocillo de los organoides con 200 microlitros de PBS. Deje que los organoides se asienten durante 15 segundos y luego retire el PBS con una pipeta P200 de un solo canal. Finalmente, agregue 200 microlitros de medio de inducción neural fresco a cada pocillo y vuelva a colocar la placa en la incubadora.