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Neurociencia
0 vistas • 2:28 min • July 8th, 2025
Tome larvas de pez cebra anestesiadas en un plato forrado con gel de agarosa y asegúrese de que el cerebro mire hacia arriba para la inyección.
Coloque el plato bajo un microscopio para visualizar los ventrículos cerebrales, que son cavidades llenas de líquido dentro del cerebro en desarrollo.
Tome una aguja de microinyección que contenga una solución de lipopolisacáridos, o LPS, un componente bacteriano para desencadenar una respuesta inmune.
Coloque la aguja sobre el tectum del cerebro, una región que contiene neuronas y células inmunes residentes, particularmente microglía.
Perforar el cerebro con la aguja e inyectar la solución de LPS en el ventrículo.
La microglía en el tejido circundante se une al LPS a través de receptores tipo toll.
La unión desencadena la liberación de citoquinas proinflamatorias, que reclutan neutrófilos en el sitio, lo que lleva a la neuroinflamación.
Los neutrófilos generan ráfagas de especies reactivas de oxígeno y liberan enzimas proteolíticas, lo que resulta en la muerte neuronal.
Transfiera las larvas inducidas por la neuroinflamación a un medio de cultivo para mantenerlas para ensayos posteriores.
Configure el micromanipulador de modo que la punta de la aguja del aparato de microinyección esté en el mismo campo de visión que las larvas con gran aumento. Derrita una solución de agarosa al 2% en agua doblemente destilada usando un microondas. Vierta la agarosa fundida en un plato de plástico. Utilice una pipeta de transferencia de plástico para transportar las larvas anestesiadas al centro de un plato de plástico recubierto de agarosa al 2%.
Oriente las larvas montadas con el lado del cerebro hacia arriba para acceder a la aguja. Ajuste el aumento del microscopio para que la estructura ventricular cerebral del pez cebra se muestre claramente en el campo de visión. Coloque la aguja con cuidado sobre el tectum del cerebro. Limpie el área del cerebro con etanol al 70% y perfore la piel del cerebro del pez cebra con la punta de la aguja lentamente usando el micromanipulador.
Presione el pedal para expulsar un nanolitro de 1X PBS o diferentes concentraciones de lipopolisacárido. Transfiera las larvas a un medio E3 limpio inmediatamente después de la inyección.