Tinción de inmunofluorescencia para la visualización de células madre neurales proliferadas en secciones de cerebro de ratón

Tomemos secciones fijas de cerebro de ratón que contienen células neurales, incluidas las células madre neurales proliferadas etiquetadas con EdU, un análogo de la timidina.

Delinee las secciones con una marca hidrofóbica para evitar la propagación de la solución.

Agrega un detergente para permeabilizar el tejido. Lavar para eliminar el exceso de detergente.

Agregue un fluoróforo para etiquetar el EdU. Retire el exceso de fluoróforos.

Usando un microscopio de fluorescencia, confirme la tinción adecuada de las células marcadas con EdU.

Aplicar un tampón de bloqueo que contenga proteínas para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos. Retire el exceso de proteínas.

Incubar con anticuerpos primarios que se unen a proteínas específicas en células madre neurales. Retire los anticuerpos no unidos.

Agregue anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo para unirse a los anticuerpos primarios. Lave los anticuerpos no unidos.

Tiñe los núcleos con un tinte y elimina el exceso de tinte.

Retire la marca hidrofóbica, aplique los medios de montaje y coloque un cubreobjetos.

Con un microscopio confocal, observe las secciones para visualizar las células madre neurales marcadas.

Para teñir la