Generación de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

Inyecte los péptidos derivados de la mielina con un adyuvante cerca de los ganglios linfáticos periféricos de un ratón anestesiado.

Los conjugados péptido-adyuvante activan las células presentadoras de antígenos, o APC, que reconocen y procesan los péptidos.

Luego, las APC migran a los ganglios linfáticos y activan las células T autorreactivas.

Inyecte periódicamente la toxina de la tos ferina por vía intraperitoneal, lo que interrumpe las uniones estrechas entre las células endoteliales y aumenta la permeabilidad de la barrera hematoencefálica.

Las células T autorreactivas circulan en la sangre y cruzan la barrera hematoencefálica para ingresar al tejido cerebral.

Estas células reconocen los péptidos en la vaina de mielina y liberan las citocinas.

Estas citocinas reclutan macrófagos y células B en el sitio.

Los macrófagos liberan especies reactivas de oxígeno que dañan los oligodendrocitos productores de mielina, mientras que las células B interactúan con las células T, se activan y producen autoanticuerpos dirigidos a la vaina de mielina.

Esto conduce a la desmielinización, lo que afecta la transmisión nerviosa.

Levante la cola del ratón; una caída gradual indica daño a los nervios, lo que indica la aparición de encefalomielitis autoinmune o EAE.

Comience este procedimiento con anestesia de ratones C57BL / 6 que se han alojado en condiciones específicas libres de patógenos como se describe en el protocolo de texto. Fije el ratón anestesiado en una mano e inyecte 30 microlitros de péptido MOG en emulsión adyuvante fluorescente completa por vía subcutánea en cada uno de los flancos de las patas traseras muy cerca de los ganglios linfáticos inguinales.

Ahora, coloque el ratón sobre su vientre e inyecte 20 microlitros de la emulsión peptídica MOG en el tejido graso blando tanto a la izquierda como a la derecha en la raíz de la cola. Además, inyecte una pequeña gota de la emulsión en el cuello del ratón. Inyecte 100 microlitros de solución de toxina de tos ferina por vía intraperitoneal en el ratón. Sostenga la cabeza del ratón debajo del centro del cuerpo para evitar la inyección en el intestino.

Reemplace la dieta de mantenimiento por la dieta de reproducción para proporcionar a los ratones alimentos de mayor contenido energético antes de soportar la enfermedad clínica esperada. Repita la inyección de toxina de tos ferina 48 horas después del primer tratamiento.

Comprueba el estado de salud de los ratones EAE cada mañana echando un vistazo al interior de las jaulas. Puntúa ratones EAE todas las tardes. Saca de la jaula a todos los ratones incluidos en el experimento EAE y comprueba si la cola tiene tono.

Mueve la cola hacia arriba con un dedo. Un ratón sano mantendrá la cola erguida. Si se ha iniciado la EAE clínica, el tono de la cola será menos visible por una caída gradual de la cola. Eventualmente, el ratón no podrá levantar la cola en absoluto.