Visualización de las motilidades de las vesículas en las neuronas mediante imágenes de fluorescencia
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:45 min. • July 8th, 2025
Tome el plásmido deseado en un medio sin suero. Este plásmido codifica proteínas específicas de vesículas con etiquetas fluorescentes.
En otro tubo, tome el reactivo de transfección diluido en un medio sin suero.
Mezclar las dos soluciones e incubar.
El reactivo de transfección se combina con el plásmido, formando un complejo.
Tome un pozo que contenga neuronas adherentes en los medios con suero. Agrega los complejos e incuba. El complejo facilita la entrada del plásmido en la célula.
Deseche el medio para eliminar los complejos no internalizados.
Agregue medios nuevos y luego incube.
El plásmido ingresa al núcleo para ser transcrito y luego se traduce en proteínas fluorescentes específicas de vesículas que marcan las vesículas en las neuronas.
Usando un microscopio de fluorescencia a temperatura controlada, adquiera imágenes a intervalos de tiempo específicos.
Para analizar las imágenes, defina los parámetros de seguimiento.
Identifica la vesícula de interés y registra sus coordenadas en cada una de las imágenes.
Recopile los datos para visualizar el movimiento de la vesícula.
En este procedimiento, mezcle 4 microgramos de plásmido con 200 microlitros de medio sin suero. En un tub
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