Generación de organoides neuronales dopaminérgicos a partir de células madre embrionarias humanas

Tome células madre embrionarias humanas, o hESC, en un matraz recubierto de matriz extracelular.

Reemplace el medio con un medio de inducción neural e incube, diferenciando las hESC en colonias de células progenitoras neurales, o NPC.

Agregue una solución enzimática para disociar las colonias.

Centrifugar, eliminar el sobrenadante y volver a suspender las células en un medio de inducción con factores de crecimiento para apoyar la diferenciación de NPC.

Agregue la suspensión celular en micropocillos de forma piramidal inversa para formar neuroesferas tridimensionales.

Transfiera las neuroesferas a una placa recubierta de matriz extracelular que contenga un medio de diferenciación con factores de crecimiento y moléculas pequeñas. Incubar bajo agitación para promover la diferenciación en neuronas progenitoras dopaminérgicas.

Reemplace el medio con medio de maduración neural y coloque las neuroesferas en un disco de membrana en un inserto de pozo de cultivo, lo que permite la difusión de aire y nutrientes.

Incubar en condiciones estáticas para formar organoides tridimensionales que consisten en neuronas dopaminérgicas maduras.

Estos organoides, que imitan un cerebro en desarrollo, son