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Neurociencia
0 vistas • 3:13 min • July 8th, 2025
Comience con una rata anestesiada, desinfecte su cabeza afeitada y asegúrela en un aparato estereotáxico.
Haga una incisión en la línea media para exponer el cráneo.
Marque dos posiciones en el cráneo y taladre pequeños agujeros.
Conecte una jeringa con virus quiméricos que contengan ARN ecotrópico del VIH dentro de un vector lentiviral al aparato estereotáxico.
Inserte la aguja en el orificio, apuntando a las células de la corteza cerebral, incluida la microglía, las células inmunitarias del cerebro.
Inyecte lentamente los virus para su distribución uniforme en la corteza.
Después de la inyección, sutura la incisión, desinfecta el área y deja que la rata se recupere.
El virus inyectado interactúa con los receptores de las células cerebrales, se fusiona y libera el ARN del VIH en el citoplasma.
El ARN se transcribe inversamente en ADN y se integra en el ADN de la célula.
La célula infectada expresa los componentes virales, produciendo nuevo ARN y proteínas.
Estos se ensamblan y liberan como nuevos virus, que aumentan la carga viral en el cerebro, estableciendo una infección activa por VIH.
Para la inyección de EcoHIV EGFP, después de confirmar una falta de respuesta al reflejo del pedal, afeite el vello de la región del cerebro y esterilice la piel expuesta 2 veces con etanol al 70% y un exfoliante a base de clorhexidina. Asegure la rata en posición prona en un aparato estereotáxico y haga una incisión de 5 a 6 centímetros a través de la piel a lo largo de la línea media del cuero cabelludo.
Marque una posición de perforación a 0,8 milímetros de lateral y una de 1,2 milímetros rostral a bregma, y taladre un orificio de 0,4 milímetros de diámetro en cada posición del cráneo. Cargue 1,04 veces 10 a la sexta unidad de transducción por mililitro de solución de lentivirus EcoHIV titulada en una jeringa inyectable de 10 microlitros y asegure la jeringa al aparato estereotáxico.
Mueva la aguja cerca de la superficie de un orificio de perforación e inserte la aguja 2,5 milímetros en el orificio. Infundir 1 microlitro de solución de virus a razón de 0,2 microlitros de virus por minuto. Cuando se haya inyectado todo el virus, deje la aguja dentro del área de inyección durante cinco minutos antes de retraer lentamente la aguja hasta que esté fuera del cráneo de la rata.
Cierre la incisión en la piel con una sutura de hilo de seda 4-0 y esterilice la solución con etanol al 70%. Luego, coloque a la rata en una cámara de recuperación con una almohadilla térmica con monitoreo hasta que esté en decúbito.