Modelado de hemorragia inducida por fármacos en larvas de pez cebra

Comience con una placa de cultivo que contenga embriones de pez cebra fertilizados en un medio embrionario.

Coloque el plato bajo un microscopio estereoscópico y use pinzas de disección para extraer el corion, la membrana externa que rodea los embriones.

Esto permite que los embriones estén expuestos al medio circundante.

Transfiera estos embriones descorionados a un plato que contenga medio embrionario con un fármaco que inhiba la síntesis de colesterol, que es crucial para mantener la integridad de los vasos sanguíneos del cerebro.

Incubar a temperatura controlada hasta que los embriones se conviertan en larvas.

Con el tiempo, el fármaco impregna las larvas en desarrollo, inhibiendo la síntesis de colesterol.

La deficiencia de colesterol debilita los vasos sanguíneos del cerebro, lo que hace que se rompan y filtren sangre al cerebro, desarrollando manchas hemorrágicas.

Observe las larvas bajo un microscopio estereoscópico.

Separar las larvas hemorrágicas, con manchas rojas distintivas, de una población no hemorrágica.

Transfiera estas larvas hemorrágicas a un nuevo plato para estudios adicionales.

A las 24 horas después de la fertilización, bajo un microscopio estereoscópico de campo claro, use pinzas de disección ultrafinas y afiladas para descorionar embriones para el tratamiento con atorvastatina. Luego, agregue 30 mililitros de medio embrionario E3 a dos placas de Petri limpias, una para el tratamiento y la otra para el control. Retire 60 microlitros de agua embrionaria de la placa de tratamiento y agregue 60 microlitros de atorvastatina 0.5 milimolar para lograr el 80% de las larvas hemorragadas.

Con una pipeta Pasteur, transfiera 100 embriones en la menor cantidad de agua posible a cada plato. Incube los dos platos a 28 grados centígrados. En cualquier momento después de 50 horas después de la fertilización, bajo el microscopio, use una pipeta Pasteur para separar cuidadosamente los peces con hemorragia de las poblaciones sin hemorragia y transfiera las larvas a nuevas placas que contengan medios E3 frescos.

Para facilitar la separación de las larvas positivas para hemorragia, puede usar pescado sin pigmento o pescado que exprese proteínas fluorescentes en los glóbulos rojos.