Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:27 min. • July 8th, 2025
Tomemos como ejemplo las células madre y progenitoras neurales primarias y las neuronas, que tienen sialoglicoproteínas marcadas por un indicador de ácido siálico.
Agregue paraformaldehído para fijar las células. Eliminar el exceso de paraformaldehído con tampón.
Incube con una mezcla de reacción que contenga sondas químicas a base de biotina, un agente reductor y un catalizador a base de metal.
El agente reductor activa el catalizador, facilitando la biotinilación de las sialoglicoproteínas.
Retire la mezcla de reacción y lave con tampón. Agregue estreptavidina conjugada con fluoróforos para unirse a las sialoglicoproteínas biotiniladas.
Retire la estreptavidina no unida y lave con tampón. Agregue proteínas y un detergente no iónico para bloquear sitios no específicos y permeabilizar las células.
Retire esta solución e incube con anticuerpos primarios dirigidos a proteínas celulares específicas.
Retire los anticuerpos no unidos.
Incubar con anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo y un colorante fluorescente para unirse a anticuerpos primarios unidos a proteínas y marcar los núcleos.
Eliminar las moléculas no unidas. Lavar con tampón.
Usando microscopía de fluorescencia, ob
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