Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:53 min. • July 8th, 2025
Comience con un cubreobjetos que contenga neuronas cultivadas que expresan proteínas de la membrana de la vesícula sináptica, incluida la sinaptofisina y la sinaptotagmina-1 marcadas con fluorescencia.
Retire el medio, agregue una mezcla de tampón de despolarización y anticuerpos primarios, luego incube.
Los iones tampón ingresan a las células, estimulando la fusión de vesículas sinápticas con la membrana, lo que expone la sinaptotagmina-1.
Los anticuerpos primarios se unen selectivamente a la sinaptotagmina-1 expuesta.
Deseche el tampón y lávelo con el medio para eliminar los anticuerpos no unidos.
Introducir medio fresco e incubar para facilitar la internalización de la membrana, formando vesículas recicladas con sinaptofisina marcada y sinaptotagmina-1 unida a anticuerpos.
Retire el medio, fije las células y lávelas.
Introduzca un tampón de bloqueo a base de detergente con anticuerpos secundarios acoplados a fluoróforos.
El detergente permeabiliza las células, permitiendo que los anticuerpos secundarios interactúen con la sinaptotagmina-1 unida a anticuerpos.
Levante el cubreobjetos, lávelo con agua y séquelo.
Coloque el cubreobjetos boca abajo en un portaobjetos con un medio de
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