Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:25 min. • July 8th, 2025
Comience con un cultivo de neuronas adherentes tratado con alfa-sinucleína o agregados alfa-S, que son grupos de una proteína mal plegada.
Estos grupos se agregan para formar inclusiones intracelulares.
Reemplace el medio con una solución de fijación para preservar la integridad celular.
Retire la solución de fijación y lave con tampón.
A continuación, agregue un tensioactivo para permeabilizar la membrana celular.
Retire el tensioactivo y lávelo con tampón.
Introducir una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Ahora, incubar con anticuerpos primarios que se unen específicamente a inclusiones alfa-S y proteínas estructurales.
Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.
Incubar con anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia.
Eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue una tinción fluorescente para etiquetar el núcleo.
Retire la mancha y lave con tampón.
Usando medios de montaje, monte el cubreobjetos con neuronas en un portaobjetos.
Bajo un microscopio fluorescente, observe inclusiones alfa-S inmunomarcadas dentro de la neurona.
Para realizar inmunofluorescencia en una campana extractora química, fije las neuronas con paraformal
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