Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:56 min. • July 8th, 2025
Comience con un pez cebra adulto anestesiado.
Transfiera el pescado a un soporte de silicona para alfileres y aplique una capa de polímero sintético para lubricar el ojo.
Luego, coloque una lente láser frente al ojo para enfocar un rayo láser en la retina.
Dirija el láser hacia el ojo del pez cebra, induciendo lesiones en la retina.
El láser induce daño térmico y la muerte de las células fotorreceptoras de la retina, iniciando un proceso degenerativo que progresa durante días y se extiende desde el epitelio pigmentado de la retina hasta la capa plexiforme externa.
En respuesta, las células de la glía de Muller (MG) sufren gliosis reactiva, volviéndose hipertróficas y proliferativas.
Estas células luego se desdiferencian en progenitores de células madre.
Las células progenitoras migran gradualmente al sitio de la lesión y, guiadas por señales espaciales y temporales del microambiente, se diferencian en tipos de células retinianas maduras durante varios días, lo que facilita la regeneración de la estructura de la retina.
Prepare una solución madre de anestésico disolviendo 400 miligramos de polvo de tricaína en 97,9 mililitros de agua del tanque y 2,1 mililitros de un molar TBS. Ajuste a pH 7,0 con un molar tris a pH 9. Para hacer la solución de trabajo, diluya la solución madre de tricaína de 1 a 25 en agua del tanque y transfiera 50 mililitros a una placa de Petri. Luego coloque el pez cebra en la solución anestésica durante 2 a 5 minutos, hasta que se vuelva inmóvil y no responda a los estímulos externos.
Transfiera cada pescado a mano a un soporte de alfileres de silicona hecho a medida para el tratamiento con láser.
La anestesia adecuada es fundamental para el bienestar del animal y el éxito del procedimiento. Por lo tanto, la solución de tricaína recién preparada es fundamental y el tiempo fuera del agua no debe exceder los 10 minutos.
Configure la potencia de salida del láser de diodo de 532 nanómetros a 70 milivatios, la duración del pulso a 100 milisegundos y el diámetro de la antena a 50 micras. Luego, aplique de 1 a 2 gotas de hidroxipropilmetilcelulosa al 2% en el ojo.
Al aplicar metilcell en el ojo, asegúrese de que la solución viscosa no caiga en las branquias.
A continuación, use una lente láser de fondo de ojo de 2 milímetros para enfocar el rayo de puntería láser en la retina. Coloque cuatro puntos láser alrededor del nervio óptico en el ojo izquierdo y use el ojo derecho no tratado como control interno.