Establecimiento de un modelo de enfermedad de Alzheimer en el cerebro de pez cebra mediante la inyección de péptido amiloide

Llene un capilar de inyección de vidrio con una solución de péptidos amiloides monoméricos sintéticos, que son péptidos anormales con propiedades propensas a la agregación.

Inserte el capilar en un soporte de microinyección.

Coloque simultáneamente un pez cebra en una placa de Petri que contenga una solución anestésica.

Una vez que el pez esté anestesiado, sosténgalo lateralmente con fórceps para asegurar la cabeza.

Haga una pequeña incisión en el cráneo del pez en la unión de las dos placas laterales para acceder al prosencéfalo rico en neuronas.

Ahora, inserte la aguja capilar a través de la incisión e inyecte la solución de péptido amiloide en el prosencéfalo.

Transfiera el pez cebra a un recipiente de recuperación con agua circulante.

Dentro del prosencéfalo, los péptidos amiloides se acumulan cerca de las neuronas.

Estos péptidos se pliegan espontáneamente para formar láminas beta y se agregan alrededor de las neuronas para formar placas amiloides tóxicas.

Estas placas dañan las neuronas y perjudican su transmisión de señales.

Esto establece un modelo de pez cebra de la enfermedad de Alzheimer, un trastorno cerebral caracterizado por placas amiloides.

Utilice un extractor de agujas con los parámetros descritos en el protocolo de texto para preparar los capilares de inyección de vidrio. Ajuste la configuración de presión en la fuente de presión a 25 PSI. Luego, en el microinyector, establezca la presión de retención en 20 PSI, la presión de expulsión en 10 PSI, el valor del período en 2.5 y el valor de activación en 100 milisegundos. A continuación, cargue el capilar de vidrio con la solución de inyección.

Luego, inserte el capilar de vidrio en el soporte de microinyección y ajuste el ángulo de inyección a 45 grados. Coloque un pez en una nueva placa de Petri llena de solución de anestesia. Una vez anestesiado, sostenga el pez con fórceps y oriéntelo para la inyección. Usando la punta de una aguja de calibre 30, genere una hendidura en el cráneo sobre el tectum óptico donde se unen las dos placas laterales. Use solo la punta de la aguja y no penetre más de 1 milímetro a través del cráneo.

Luego, mientras continúa sosteniendo el pescado, inserte la punta del capilar de vidrio a través del sitio de la incisión. Oriente la punta del capilar de vidrio hacia el telencéfalo en un ángulo de 45 grados, luego inyecte 1 microlitro de la solución. Vuelva a colocar el pescado en un recipiente de transporte hasta que se recupere. Luego, conéctelo al recipiente al agua de pescado que circula regularmente para garantizar una calidad óptima del agua.