Una técnica para infligir una lesión cerebral traumática de cabeza cerrada en moscas Drosophila

Tome el control y pruebe las moscas Drosophila adultas bajo anestesia.

Coloque la mosca de prueba en un soporte y golpéela suavemente para colocar la cabeza de la mosca fuera de la punta. Asegúrese de que las piezas bucales y el cuerpo de la mosca permanezcan dentro del soporte para evitar lesiones no deseadas.

Conecte el soporte a un dispositivo de ataque con la cabeza de la mosca hacia abajo.

El dispositivo está conectado a un suministro de gas controlado y contiene un impactador propulsado por gas para infligir lesiones.

Lanza una ráfaga de gas para impulsar el impactador y golpear la cabeza de la mosca, induciendo una lesión cerebral traumática en la cabeza cerrada sin daño externo.

El estrés mecánico resultante daña las neuronas, perjudicando su función.

Separe el soporte para liberar la mosca, luego transfiérala a un vial para su recuperación.

Para la mosca de control, aplique una ráfaga de gas sin golpearla con el impactador.

Las moscas de control y de prueba ahora están listas para evaluar el impacto de la lesión.

Anestesiar a una sola mosca hembra adulta de dos días de edad con dióxido de carbono.

Desde la almohadilla de dióxido de carbono, use un cepillo fino para transferir suavemente la mosca al soporte.

Luego, golpee suavemente el soporte hasta que la cabeza sobresalga de la punta.

Si la probóscide está expuesta, use una aguja de jeringa roma de 1 mililitro para volver a meterla suavemente dentro de la punta. Es fundamental mantener el cuerpo de la mosca, especialmente la parte de la boca, dentro del soporte. De lo contrario, la mosca puede morir por daños en los órganos internos o por no poder ingerir alimentos.

A continuación, ajuste la presión del gas a 100 kilopascales y ajuste el flujo según sea necesario. Una vez cargada la mosca, apriete el soporte al cilindro de la jeringa con el conector, de modo que la cabeza de la mosca quede hacia abajo.

Luego, usando el interruptor de palanca, envía una ráfaga de gas que mueve el impactador para golpear la mosca una vez y solo una vez.

Ahora, separe el soporte para moscas y vuelva a colocar la mosca en la almohadilla de dióxido de carbono.

Cepille la mosca en un vial vacío hasta que se recupere.

Mantenga una mosca por vial. La recuperación toma solo unos minutos.

Repita el proceso para probar cuatro moscas por grupo experimental. Procesar dos grupos, una prueba y una simulación, solo debería tomar de 20 a 30 minutos. Trate las farsas como animales de prueba, excepto que no incluya una barrera de aerosol en el tubo impactador.