Infusión cerebral estereotáxica directa de proteínas beta-amiloide para un modelo de enfermedad de Alzheimer

Comience con un ratón anestesiado con el cráneo expuesto. El ratón está asegurado en un marco estereotáxico que contiene una jeringa precargada con proteínas beta amiloides propensas a la agregación.

Marque el bregma, un punto de referencia clave para determinar las coordenadas de infusión de proteínas.

Mueva la jeringa y toque el bregma, luego la lambda, para determinar las coordenadas dorsal-ventral, asegurando una profundidad precisa de la aguja.

Vuelva a colocar la jeringa por encima de la coordenada medial-lateral predeterminada, apuntando a la circunvolución dentada, crucial para el procesamiento de la memoria.

Toque la superficie del cráneo, asegurándose de que la coordenada dorsal-ventral esté dentro del límite, y márquela. Repita este procedimiento en el lado opuesto.

Perfore en la coordenada medial-lateral marcada, inyecte las proteínas beta-amiloides en la circunvolución dentada y manténgala presionada para evitar el reflujo.

Perfore e inyecte proteínas beta amiloides en el lado opuesto para una dispersión uniforme de proteínas.

Separe las barras de los oídos del ratón y luego suture la incisión.

Con el tiempo, las proteínas beta amiloides se agregan para formar placas que degradan las neuronas de la circunvolución dentada e interrumpen el procesamiento de la memoria, lo que resulta en la enfermedad de Alzheimer.

Haga una incisión de 2 a 3 milímetros en la línea media del cuero cabelludo con un bisturí. Use tijeras finas rectas para extender la línea de incisión a aproximadamente 1,0 centímetros para exponer la sutura sagital, el bregma y la lambda del cráneo. Después de eso, use fórceps para separar la piel.

Limpie el cráneo con un hisopo de algodón estéril empapado con solución salina estéril. Luego use un hisopo de algodón limpio y seco para secar el cráneo. A continuación, marque un punto en el bregma. Coloque la jeringa Hamilton con el micromanipulador de modo que la punta de la aguja toque el punto en el bregma. Luego, registre la coordenada DV.

Marque un punto en el punto lambda. Asegúrese de que el eje AP del cráneo esté nivelado moviendo la jeringa posteriormente al punto lambda. La punta de la aguja debe tocar el punto lambda como lo hizo con el punto de bregma. Después de eso, registre la posición DV. Las coordenadas DV para bregma y lambda deben estar dentro de 0,5 milímetros.

Ahora, regrese la punta de la aguja al punto de bregma. Registre la posición inicial de AP. Luego, calcule la posición AP final restando 2 milímetros de la coordenada AP inicial y vuelva a colocar la aguja de la jeringa en la coordenada AP final.

A continuación, registre la coordenada ML actual. Calcule las coordenadas ML finales izquierda y derecha sumando o restando 1,3 milímetros de la coordenada ML inicial y mueva la aguja de la jeringa a las coordenadas ML finales. Toque la superficie del cráneo con la punta de la aguja en ambas coordenadas ML finales y asegúrese de que las coordenadas DV estén dentro de 0,5 milímetros.

Mientras está en la coordenada ML final, tire de la aguja hacia arriba de 0,5 a 1 centímetro sobre el cráneo. Marca un punto en el cráneo con un marcador de punta extra fina de color oscuro. Repita este paso para el lado contralateral del cráneo. Luego, retire la jeringa.

Taladre un agujero en la coordenada ML izquierda o derecha en el cráneo con una broca de 0,8 milímetros. Repita este paso para el lado contralateral. Luego, mueva la jeringa a uno de los orificios recién introducidos. Baje la aguja hasta justo más allá del cráneo y tenga cuidado de no perforar el cerebro.

Para asegurarse de que la aguja haya pasado por el cráneo, empuje suavemente la aguja contra el cráneo para asegurarse de que la aguja no se salga del orificio. A continuación, registre la coordenada DV inicial. Calcule la coordenada DV final restando 2,2 milímetros de la coordenada DV inicial y baje la aguja a la coordenada DV final.

Luego, configure la bomba inyectora estereotáxica para infundir 4 microlitros de Aβ_1-42 en la circunvolución dentada a una velocidad de 0,5 microlitros por minuto. Después de la infusión, deje que la aguja permanezca en su lugar durante un minuto más para minimizar el reflujo de la solución fuera del lugar de la inyección. Después de eso, mueva la aguja al otro lado del cerebro y repita el procedimiento.

Ahora, desenrosque las barras para los oídos. Use fórceps de patrón estándar para estudiantes para cerrar el cuero cabelludo y sellar la herida con una sutura. Quítese el protector nasal y retire el mouse.