Tinción inmunofluorescente de poblaciones neuronales en el tracto gastrointestinal murino embrionario
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:58 min. • July 8th, 2025
Tome un tracto gastrointestinal de ratón embrionario fijo y transgénico en la etapa de desarrollo deseada.
El sistema nervioso entérico del tracto gastrointestinal incluye neuronas entéricas y neuronas colinérgicas que expresan colina acetiltransferasa.
Estas neuronas colinérgicas también expresan una proteína fluorescente impulsada por el promotor de la colina acetiltransferasa.
Incube el tracto con un detergente no iónico y proteínas para permeabilizar las células y evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Reemplácelo con anticuerpos primarios. Incubar para que los anticuerpos se unan a sus proteínas diana en las neuronas, respectivamente.
Retire los anticuerpos no unidos y lave con tampón.
Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos para unirse específicamente a los anticuerpos primarios unidos a las proteínas diana.
Retire el exceso de anticuerpos y lave con tampón.
Sumerja el tracto marcado en un medio de montaje que contenga un tinte nuclear para teñir los núcleos. Ahora, monte un cubreobjetos.
Usando microscopía confocal, visualice y analice la distribución de las neuronas colinérgicas en el tracto gastrointestinal.
Coloque los tractos gastrointestin
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