Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:12 min. • July 8th, 2025
Coloque un ratón transgénico en posición dorsal. El ratón expresa una forma mutada de la proteína alfa-sinucleína, que es propensa a la agregación.
Tome una suspensión de fibrillas de alfa-sinucleína, agregados de proteína alfa-sinucleína mal plegada.
Inyectar las fibrillas en la cavidad peritoneal para permitir su distribución sistémica.
Una vez en el torrente sanguíneo, las fibrillas llegan al sistema nervioso central y se unen a las células endoteliales de la barrera hematoencefálica.
Las fibrillas se transportan a través de vesículas a través de las células y entran en el tejido nervioso. Luego invaden las neuronas a través de la endocitosis y promueven la agregación de las proteínas alfa-sinucleína mutadas.
Estos agregados se liberan por exocitosis y se propagan a las neuronas, microglía y astrocitos vecinos.
El reconocimiento de los agregados hace que la microglía libere especies reactivas de oxígeno, que dañan el tejido, y citoquinas, que reclutan células inmunitarias adicionales. Esto da como resultado una neuroinflamación que conduce a la muerte de las células neuronales.
Permita que el ratón se recupere para evaluar la neuroinflamación mediada por alfa-sinucleína.
Para inyecciones intraperitoneales, narcotice brevemente a los animales en una cámara de anestesia con isoflurano. Nuevamente, pellizque el dedo del pie del animal y confirme que no retira su extremidad posterior para garantizar una anestesia adecuada. Llene una jeringa hipodérmica desechable de calibre 27 con 50 microlitros de fibrillas de alfa-sinucleína sonicada o PBS.
Sostenga al animal en posición dorsal, con la cabeza alejada del investigador y hacia abajo a aproximadamente 45 grados. Inyectar directamente en el peritoneo del ratón sin penetrar en el intestino delgado o ciego ubicado detrás de la pared abdominal. Vigile a los animales hasta que se hayan recuperado de la anestesia.