Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:36 min. • July 8th, 2025
Comience con una muestra de tejido cerebral humano postmortem congelada de un caso confirmado de enfermedad neurodegenerativa.
Eliminar la materia gris rica en agregados proteicos insolubles, un sello distintivo de la enfermedad.
Transfiera el tejido a un homogeneizador.
Agregue un tampón que contenga inhibidores y homogeneice para liberar componentes intracelulares.
Los inhibidores bloquean las enzimas proteasa y fosfatasa, evitando la degradación de proteínas.
Transfiera el homogeneizado a un tubo y agregue un tampón de detergente iónico. Incubar.
El detergente solubiliza las proteínas plegadas de forma nativa, mientras que los agregados de proteínas mal plegados permanecen intactos.
Sonicar para completar la disociación celular.
Transfiera el homogeneizado a un tubo de ultracentrífuga y centrifugue a alta velocidad.
Los agregados se asientan en la parte inferior.
Retire el sobrenadante que contiene proteínas solubles en detergente.
Lave los agregados con un tampón de detergente iónico, centrifugue y elimine el sobrenadante.
Agregue tampón de urea para desnaturalizar los agregados de proteínas, haciéndolos solubles.
Transfiera los agregados de proteínas solubilizados a un tubo y
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