Generación de una lesión cortical por arma blanca en un modelo de ratón para inducir astrogliosis reactiva

Asegure un ratón anestesiado en un marco estereotáxico.

Afeita su cabeza y desinfecta el sitio. Aplique ungüento para los ojos para evitar la sequedad de la córnea.

Haga una incisión para exponer el cráneo.

Retire las membranas suprayacentes y limpie la superficie con solución salina.

Marque una región en el cráneo, apuntando a la corteza.

Detalle a lo largo de la región marcada. Aplique solución salina para mantener la hidratación de los tejidos.

Retire la pieza ósea suelta, exponiendo la corteza subyacente.

Coloque espuma de gel empapada en solución salina para evitar que el tejido se seque y absorba la sangre.

Coloque una cuchilla estéril conectada a un soporte de sonda sobre la corteza. Luego, retire la espuma de gel.

Baje la cuchilla para penetrar en la corteza y muévala horizontalmente con movimientos repetidos para crear una lesión mecánica.

Retire la cuchilla y use espuma de gel para absorber la sangre. Sutura la incisión quirúrgica.

En el sitio de la lesión, los astrocitos sufren gliosis reactiva, donde se activan y proliferan, liberando moléculas protectoras que reducen la inflamación y apoyan la reparación de tejidos.

En este paso, coloque un mouse completamente sedado en el marco estereotáxico. Asegure su nariz en el cono de la nariz, que está conectado al isoflurano. A continuación, apriete las barras de los oídos y asegúrese de que la cabeza esté estable.

Afeita la cabeza desde el nivel de los ojos hasta el nivel de las orejas. Luego esterilice la piel con tres exfoliantes alternos de alcohol isopropílico y solución de yodo Betadine. Luego, aplique ungüento en ambos ojos para evitar que se sequen.

Controle la profundidad de la anestesia del animal pellizcando el dedo del pie o la cola. El ratón está en el plano quirúrgico apropiado cuando no hay respuesta y la respiración es lenta y uniforme. Haga una incisión parasagital en la piel desde justo detrás de los ojos hasta casi el punto entre las orejas en un solo corte firme. Mueva la piel a un lado y sujete el lado derecho con un hemostático.

Bajo el microscopio, limpie la membrana suprayacente en el cráneo usando el lado opaco del bisturí y aplicadores con punta de algodón. Luego limpie el cráneo con un aplicador con punta de algodón humedecido en solución salina al 0,9% y deje que se seque por completo. Con una regla pequeña y un marcador permanente, marque el borde anterior de la craneotomía a 1 milímetro caudal a la sutura coronal y luego marque el borde izquierdo de la craneotomía a 1 milímetro lateral a la sutura sagital.

A continuación, marque los bordes derecho y caudal de la craneotomía a 4 milímetros de las suturas sagital y coronal, respectivamente. Con una broca de 0,5, taladre con cuidado el contorno del marcador permanente y asegúrese de no atravesar el cráneo por completo. Presione suavemente el trozo aislado de hueso parietal con fórceps. El hueso adelgazado está listo para ser eliminado cuando está lo suficientemente débil alrededor del perímetro.

Ahora, con una jeringa de 10 mililitros equipada con una aguja de calibre 23, aplique una pequeña cantidad de solución salina al 0,9% en el hueso aislado y el área perforada. Conecte el brazo manipulador al aparato estereotáxico. A continuación, coloque una nueva hoja de bisturí en el soporte de la sonda con el lado afilado hacia la rostra.

Manteniendo el brazo manipulador fuera del camino, levante con cuidado la pieza de hueso con un par de pinzas en ángulo insertando la punta en el costado del hueso y tirando de ella con un solo movimiento. Luego, coloque un pequeño trozo de espuma de gel absorbible empapada en el cerebro descubierto para evitar que se seque y absorba la sangre que pueda estar presente. Una vez que la espuma de gel se coloca en el cerebro, gire el brazo manipulador en su lugar. Ajuste la cuchilla para centrarla sobre la espuma de gel.

Luego retire la espuma de gel y baje la cuchilla hasta que la punta toque la duramadre sin perforarla. Marque las coordenadas dorsal-ventral usando la escala vernier en el brazo vertical del marco estereotáxico. A continuación, usando el brazo manipulador, baje lentamente la hoja con precisión 3 milímetros en el cerebro. Deje que la cuchilla permanezca en su lugar durante 5 a 10 segundos.

Luego, mueva lentamente el brazo estereotáxico con la hoja en dirección rostral-caudal tres veces. Deje que la cuchilla alcance los límites rostral y caudal de la craneotomía antes de moverse hacia el extremo opuesto. Luego, levante lentamente el brazo estereotáxico y retire la cuchilla del cerebro.

Coloque otro trozo de espuma de gel en la superficie del cerebro inmediatamente para absorber el exceso de sangre o líquido. Mientras tanto, retire el brazo estereotáxico y deseche la hoja del bisturí. Una vez que el sangrado se haya detenido, retire la espuma de gel.

Cierre la herida suturando la piel con suturas no absorbibles, como Ethilon o Prolene, y retire las suturas de 9 a 10 días después de la cirugía. A continuación, administre de 0,5 a 1 mililitro de solución de Ringer lactato por vía subcutánea, para asegurar la hidratación.