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Neurociencia
0 vistas • 2:18 min • July 8th, 2025
Tome un cerebro de ratón perfundido en el búfer.
El cerebro está infectado con Listeria monocytogenes resistente a la estreptomicina, una bacteria patógena.
El paso de perfusión elimina la sangre del cerebro, asegurando que las mediciones de la carga bacteriana reflejen la carga de Listeria monocytogenes en el tejido.
A continuación, homogeneice el cerebro con un homogeneizador esterilizado para descomponer el tejido y liberar bacterias.
Ahora, prepare diluciones en serie del homogeneizado cerebral usando tampón.
Coloque estas diluciones en placas de agar de infusión cerebral y cardíaca que contengan estreptomicina, un antibiótico.
Incubar los platos. El agar de infusión cerebro-corazón proporciona nutrientes para el crecimiento de Listeria monocytogenes, mientras que la estreptomicina selecciona bacterias resistentes, permitiendo que solo se formen colonias de Listeria resistentes a la estreptomicina.
Cuente el número de colonias en la placa para determinar las unidades formadoras de colonias, una medida de la carga bacteriana infecciosa viable en el cerebro.
Con fórceps, abra el cráneo para exponer el cerebro y coloque una espátula entre la parte inferior del cerebro y la base del cráneo para transferir cuidadosamente el cerebro a un tubo de 15 mililitros que contiene 5 mililitros de PBS de 4 grados Celsius.
En un gabinete de bioseguridad, inserte la punta y ejecute un homogeneizador de tejidos durante 10 segundos en lejía secuencial al 5%, agua estéril, etanol al 75% y soluciones de agua estéril en tubos cónicos separados de 15 mililitros. Cuando la punta se haya esterilizado completamente, homogeneice el cerebro infectado en su tubo.
Prepare diluciones seriadas diez veces mayores de cada homogeneizado de órganos en PBS estéril y coloque las diluciones en placas de agar de infusión cerebro-corazón. Luego, incube los cultivos de dilución homogeneizados a 37 grados Celsius durante la noche y cuente el número de colonias en cada placa para determinar el número total de bacterias por órgano o mililitro de sangre.
Este artículo demuestra un protocolo para cuantificar la carga bacteriana infectiva de Listeria monocytogenes en el cerebro de ratón perfundido. El método implica un procesamiento cuidadoso del tejido, siembra selectiva y conteo de colonias para evaluar con precisión la carga bacteriana en el tejido cerebral tras la infección.
La cuantificación de la colonización bacteriana en tejido cerebral de ratón perfundido permite una evaluación precisa de la dinámica de la infección y de la carga patógena específica del tejido. Este flujo de trabajo apoya la reducción mecanicista de riesgos en modelos de enfermedades infecciosas e informa la validación de objetivos para estudios de interacción huésped-patógeno. La medición precisa de la carga bacteriana es fundamental para la investigación traslacional y las decisiones de cartera en I+D de agentes antiinfecciosos.
Este método se integra en el continuo del descubrimiento de enfermedades infecciosas, desde la prueba inicial de hipótesis hasta la validación en modelos preclínicos y la investigación traslacional.
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Última actualización: 29 agosto 2026