Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:18 min. • July 8th, 2025
Tome un cerebro de ratón perfundido en el búfer.
El cerebro está infectado con Listeria monocytogenes resistente a la estreptomicina, una bacteria patógena.
El paso de perfusión elimina la sangre del cerebro, asegurando que las mediciones de la carga bacteriana reflejen la carga de Listeria monocytogenes en el tejido.
A continuación, homogeneice el cerebro con un homogeneizador esterilizado para descomponer el tejido y liberar bacterias.
Ahora, prepare diluciones en serie del homogeneizado cerebral usando tampón.
Coloque estas diluciones en placas de agar de infusión cerebral y cardíaca que contengan estreptomicina, un antibiótico.
Incubar los platos. El agar de infusión cerebro-corazón proporciona nutrientes para el crecimiento de Listeria monocytogenes, mientras que la estreptomicina selecciona bacterias resistentes, permitiendo que solo se formen colonias de Listeria resistentes a la estreptomicina.
Cuente el número de colonias en la placa para determinar las unidades formadoras de colonias, una medida de la carga bacteriana infecciosa viable en el cerebro.
Con fórceps, abra el cráneo para exponer el cerebro y coloque una espátula entre la parte inferior del cerebro y la base del cráneo para transferir cuidadosamente el cerebro a un tubo de 15 mililitros que contiene 5 mililitros de PBS de 4 grados Celsius.
En un gabinete de bioseguridad, inserte la punta y ejecute un homogeneizador de tejidos durante 10 segundos en lejía secuencial al 5%, agua estéril, etanol al 75% y soluciones de agua estéril en tubos cónicos separados de 15 mililitros. Cuando la punta se haya esterilizado completamente, homogeneice el cerebro infectado en su tubo.
Prepare diluciones seriadas diez veces mayores de cada homogeneizado de órganos en PBS estéril y coloque las diluciones en placas de agar de infusión cerebro-corazón. Luego, incube los cultivos de dilución homogeneizados a 37 grados Celsius durante la noche y cuente el número de colonias en cada placa para determinar el número total de bacterias por órgano o mililitro de sangre.