Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:59 min. • July 8th, 2025
Comience con un cachorro de ratón modificado genéticamente que porte el gen CCM2, que es esencial para la estabilidad de los vasos sanguíneos.
Este gen está flanqueado por dos sitios loxP. Las células endoteliales del cachorro también expresan la enzima Cre recombinasa fusionada con un receptor de estrógeno o ER.
Inyecte intragástricamente 4-hidroxitamoxifeno o 4-HT en el cachorro.
El 4-HT se difunde a través de las células endoteliales y se une a la porción receptora de estrógeno de la proteína de fusión Cre-ER.
Esta unión desencadena un cambio conformacional que activa la Cre recombinasa, que ingresa al núcleo de las células endoteliales y se une a los sitios loxP.
Esto facilita el evento de recombinación entre los sitios loxP, formando un bucle y extirpa el segmento del gen CCM2.
La pérdida de CCM2 altera la integridad de las células endoteliales, comprometiendo la estabilidad de las paredes de los vasos sanguíneos.
Esto conduce al desarrollo de estructuras vasculares anormales inflamadas conocidas como malformaciones cavernosas cerebrales o CCM, que son frágiles y propensas a fugas.
Comience disolviendo 4-HT en etanol al 100% hasta una concentración de 10 miligramos por mililitro. Prepare alícuotas de 30 microlitros y luego guárdelas a menos 80 grados centígrados. El día de uso, diluya la alícuota 4-HT en aceite de maíz a 0,5 miligramos por mililitro. Luego, use una jeringa de insulina para inyectar intragástricamente 50 microlitros de 4-HT en cachorros neonatales P1 para inducir lesiones experimentales de CCM.