Obtención de suspensiones celulares a partir de tejidos cerebrales de ratón isquémico

Tome tejidos cerebrales isquémicos de ratón perfundidos que contengan células cerebrales y células inmunitarias infiltradas.

Pica los pañuelos en un colador y enjuaga con tampón.

Centrifugar el filtrado y desechar el sobrenadante.

Vuelva a suspender el gránulo en una solución de enzimas digestivas y transfiéralo a un tubo de microcentrífuga.

Incubar para que las enzimas digestivas descompongan la matriz extracelular, aflojando las células.

Filtre la suspensión y enjuague con un tampón que contenga ADNasa para eliminar el ADN contaminante.

A continuación, lave con tampón sin DNasa.

Centrifugar el filtrado y desechar el sobrenadante.

Vuelva a suspender las celdas en el medio de gradiente de densidad. Luego, transfiera el contenido a un tubo nuevo y mezcle. Centrífuga para separar los componentes por densidad.

Retire el sobrenadante que contiene mielina y desechos.

Vuelva a suspender el gránulo en tampón libre de ADNasa. Transfiéralo a un tubo nuevo y centrifugue nuevamente.

Deseche el sobrenadante para asegurar una eliminación suficiente del medio de gradiente de densidad.

Finalmente, vuelva a suspender las celdas en el búfer para un análisis más detallado.

Usando el extremo del émbo