Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:04 min. • July 8th, 2025
Comience con una diapositiva que contenga una sección delgada de un organoide cortical que contiene células gliales y neuronas en varias etapas del envejecimiento.
Las neuronas envejecidas, en un estado de senescencia con función celular en declive, contienen altos niveles de beta-galactosidasa.
La sección se trata previamente con un fijador para estabilizar la estructura celular y un agente permeabilizante para permeabilizar sus membranas.
Coloque el portaobjetos en un recipiente de tinción para lavarlo con un tampón para eliminar cualquier rastro de solución.
Tiña el portaobjetos con una solución que contenga un sustrato para la enzima beta-galactosidasa e incuba.
El sustrato ingresa a las células, donde la beta-galactosidasa escinde el sustrato, produciendo un producto de color azul que se acumula más en las neuronas envejecidas.
Lave repetidamente la sección.
Agregue un medio de montaje antidecoloración y deje que se solidifique, asegurando la integridad de la sección teñida.
Observe el portaobjetos bajo un microscopio; el área con un producto de color azul intenso indica el envejecimiento de las neuronas dentro del organoide.
Después de crioseccionar los organoides, retire el exceso de solución de montaje transfiriendo los portaobjetos a un recipiente de pie con tapa y lave el tejido organoide seccionado tres veces con PBS durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego, incube los portaobjetos durante la noche a 37 grados Celsius con una solución de tinción de beta-galactosidasa recién hecha. Lave los tejidos teñidos tres veces con PBS durante 10 minutos cada uno a temperatura ambiente para eliminar la solución de beta-galactosidasa.
Ahora, monte los pañuelos lavados con un medio de montaje antidecoloración de vidrio y deje que la solución de montaje se solidifique durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de verla bajo el microscopio.