Desencadenamiento y seguimiento de convulsiones inducidas por calor en un modelo de ratón transgénico

Tomemos un ratón adulto transgénico anestesiado que porta una mutación genética que conduce a canales de sodio disfuncionales en las interneuronas inhibidoras.

Asegure una sonda rectal lubricada para controlar su temperatura corporal.

Coloque al ratón en una jaula de recuperación hasta que su temperatura corporal se estabilice.

A continuación, transfiera el animal a una cámara de calor precalentada y comience la grabación de video.

Aumente la temperatura de la cámara a intervalos regulares mientras monitorea el aumento gradual de la temperatura corporal del ratón.

A medida que aumenta la temperatura corporal, la disfunción en los canales de sodio empeora, lo que reduce la liberación de neurotransmisores inhibidores.

Esta liberación reducida interrumpe el equilibrio entre la excitación e inhibición neuronal, lo que resulta en hiperexcitabilidad neuronal y convulsiones.

Registre la temperatura corporal durante la convulsión y observe sus características de comportamiento.

Ahora, coloque el mouse sobre una almohadilla de enfriamiento hasta que su temperatura corporal se normalice.

Finalmente, retire la sonda rectal y deje que el mouse se recupere.

Comience encendiendo la cámara de calor del mouse, con el botón de encendido y luego presione el botón de encendido de calor. Usando el teclado del controlador de temperatura digital, ajuste la temperatura de la cámara de calor a 50 grados centígrados. Cubra el piso de la cámara de calor con ropa de cama de mazorca.

Monte una cámara de grabación de video frente a la cámara de calor. Cubra una placa de Petri de 140 milímetros de diámetro con capas gruesas de papel de seda y colóquela sobre hielo para que sirva como almohadilla para enfriar. Para el ensayo de detección, asegúrese de que el peso corporal del ratón sea de 15 gramos o más. Antes de comenzar el procedimiento, confirme que el ratón esté completamente anestesiado con un pellizco en el dedo del pie.

Cubra la punta metálica de la sonda de temperatura rectal con un lubricante e insértela suavemente en el mouse. Asegure la sonda rectal a la cola del ratón con cinta adhesiva. Coloque el ratón en una nueva jaula de recuperación forrada con ropa de cama de mazorca. Inicie un temporizador y observe al ratón durante 5 minutos mientras controla la temperatura corporal central hasta que el ratón se recupere por completo de la anestesia y la temperatura se estabilice entre 35 y 36 grados centígrados.

Al final de los 5 minutos, anote la temperatura corporal del ratón como la temperatura corporal inicial a 0 minutos. Transfiera el ratón rápidamente al suelo de la cámara de calor del ratón precalentada para iniciar la prueba del experimento. Después de colocar el mouse en la cámara del mouse precalentada, encienda la cámara y el cronómetro.

Aumente la temperatura de la cámara de calor a intervalos regulares, de modo que la temperatura corporal del ratón aumente a un ritmo de 0,25 a 0,5 grados Celsius por minuto. Comience a registrar la temperatura corporal del ratón a intervalos de 1 minuto durante la duración del experimento. A los 9,5 minutos, ajuste la temperatura de la cámara de calor a 55 grados centígrados, para estabilizar la temperatura de la cámara de calor a 55 grados centígrados en el minuto 10.

Del mismo modo, logre una temperatura estable de la cámara de calor a 60 grados Celsius en el minuto 20. Cada ensayo de detección de convulsiones dura 30 minutos. Si el ratón experimenta una convulsión, registre la temperatura corporal del ratón durante la convulsión como una temperatura umbral de convulsión. Tome nota de las características del comportamiento convulsivo que muestra el ratón.

Luego, levante rápidamente el mouse de la cámara y colóquelo en la almohadilla de enfriamiento. Cuando la temperatura corporal del ratón baje a 36 a 37 grados Celsius, transfiéralo a una jaula de recuperación. Para quitar la sonda rectal del ratón, corte con cuidado la cinta entre la cola del ratón y el alambre de la sonda rectal.