Inmunotinción de interneuronas en una sección de hipocampo de rata

Tomemos una sección fija del hipocampo de rata que contiene una interneurona llena de biocitina, una molécula conjugada con biotina.

A continuación, agregue una solución que contenga proteínas bloqueadoras y un detergente no iónico para evitar la unión inespecífica y permeabilizar las neuronas.

Incubar con un anticuerpo primario dirigido a receptores cannabinoides específicos en las interneuronas.

Lavar con tampón para eliminar el exceso de anticuerpos.

Luego, agregue un colorante fluorescente conjugado con estreptavidina y un anticuerpo secundario conjugado con fluoróforo.

Durante la incubación, la estreptavidina se une fuertemente a la biocitina, lo que permite la visualización de la interneurona llena de biocitina, mientras que el anticuerpo secundario se dirige a los anticuerpos primarios unidos al receptor en las interneuronas.

Enjuague con tampón, eliminando las moléculas no unidas.

Ahora, monte la sección con medios de montaje acuosos. Coloque un cubreobjetos y séllelo.

Con un microscopio de fluorescencia, visualice la expresión de la interneurona llena de biocitina y el receptor cannabinoide, lo que permite analizar la morfología y la distribución del receptor de la interne