Inducción de lesiones neuronales selectivas utilizando un láser de alta potencia en una larva de Drosophila

Coloque una larva de Drosophila anestesiada con la cabeza hacia arriba sobre una gota de aceite en un portaobjetos de vidrio que contenga manchas de grasa al vacío.

Coloque un cubreobjetos y presiónelo suavemente para hacer contacto con la larva.

Ajuste la larva para exponer la región que contiene las neuronas diana que expresan proteínas fluorescentes.

Asegure el portaobjetos en un microscopio de dos fotones.

Use un láser de baja potencia para minimizar el daño y escanee la larva para localizar la región con las neuronas objetivo fluorescentes.

A continuación, ajuste la ventana de escaneo para enfocarse en la región objetivo que contiene axones, un tipo de proyecciones neuronales.

Ahora, reduzca la velocidad de escaneo y aumente la potencia del láser.

El láser de alta potencia golpeará los axones objetivo, generando calor localizado que los daña y mejora la fluorescencia alrededor del sitio de la lesión.

Finalmente, vuelva al modo láser de baja potencia. La presencia de pequeños cráteres en forma de anillo en el sitio de la lesión confirma una lesión neuronal exitosa.

Comience anestesiando las larvas. En una campana extractora, coloque un plato de vidrio de 60 milímetros en una pl