Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:19 min. • July 8th, 2025
Comience con un cultivo adherente de neuronas humanas maduras en una placa recubierta de matriz.
Agregue vectores lentivirales que codifiquen una proteína tau humana mutante fusionada con un reportero de proteína fluorescente amarilla (YFP).
El lentivirus se adhiere a receptores específicos de la superficie celular neuronal, lo que permite la fusión de la membrana viral-huésped y la liberación de ARN viral y enzimas.
El ARN viral se transcribe de forma inversa en ADN.
La integrasa viral transporta el ADN al núcleo, lo que facilita la integración en el genoma del huésped y conduce a la producción de proteína tau mutante marcada con YFP.
Con el tiempo, la tau mutante forma agregados citoplasmáticos en las células transducidas.
Lave las células con medios nuevos para eliminar las partículas virales no internalizadas.
Continúe la incubación con cambios regulares de medios para mantener la viabilidad neuronal y promover la agregación de proteínas.
Visualiza las neuronas bajo un microscopio.
Las neuronas transducidas con éxito exhiben agregados citoplasmáticos de proteína tau mutante marcada con YFP fluorescente.
Para transducir neuronas con lentivirus, use un recuento de títulos de 340,
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