Establecimiento de un modelo de rata con hemorragia subaracnoidea inducida por inyección de sangre autóloga

Tomemos una rata anestesiada con el cráneo expuesto y una sonda implantada para medir la presión intracraneal.

Usando un punto de referencia en el cráneo, marque el sitio objetivo y taladre un agujero.

Retire los fragmentos de hueso y rellene el agujero con cera ósea.

Taladre otro agujero. Localice un vaso sanguíneo y asegure una sonda para medir el flujo sanguíneo cerebral.

Tome una aguja e insértela en el cerebro hasta que sienta el cráneo.

Retraer ligeramente para asegurar su colocación delante del quiasma óptico, donde se encuentran los principales vasos sanguíneos.

Llene la cámara de la aguja con sangre fresca extraída de la cola de la rata y conecte la jeringa que contiene sangre.

Inyecte la sangre en el espacio subaracnoideo lleno de líquido entre las membranas cerebrales externa e interna, lo que aumenta la presión intracraneal, causando constricción de los vasos sanguíneos.

Esto conduce a una disminución del flujo sanguíneo cerebral, estableciendo un modelo de hemorragia subaracnoidea.

Para colocar la sonda láser Doppler, haga una incisión de 15 milímetros caudalmente en la línea media, comenzando justo antes de los ojos. Después de eliminar el tejido conectivo y los músculos con fórceps, use el extremo de un hisopo de algodón estéril como régimen para identificar el bregma y las suturas coronales.

Después de colocar el retractor armado, coloque una aguja espinal de calibre 25 en el marco estereotáxico exactamente en el bregma y anote la posición. A continuación, retire la aguja del bregma. Mueva el marco hacia adelante 6,5 milímetros, luego vuelva a colocar la aguja en la línea media para marcar el lado de la perforación.

Perfore hasta que la duramadre se identifique debajo del hueso. Con unas pinzas rectas, retire suavemente los fragmentos de hueso y rellene la cavidad con cera ósea. A continuación, de 3 a 4 milímetros laterales a la derecha del bregma y justo antes de la sutura coronal para el Doppler láser, taladre otro orificio teniendo cuidado de no penetrar en la duramadre.

Busque los vasos donde el láser Doppler puede medir el flujo sanguíneo. Coloque el láser Doppler y verifique los valores. Se requiere un valor mínimo de 100 unidades de fundente. Si los valores siguen siendo aceptables después de retirar el microscopio, agregue 1 gota de pegamento para fijar la sonda. Vuelva a verificar para confirmar si el valor está por encima de 80 unidades de flujo.

Para inducir la hemorragia subaracnoidea, inserte la aguja suavemente a través del cráneo en la línea media entre los hemisferios hasta que se sienta resistencia debido a la base del cráneo. Retraiga la aguja 1 milímetro para asegurar la colocación correcta justo antes del quiasma óptico. Para garantizar el resultado más homogéneo al inyectar la sangre, gire la aguja en el sentido de las agujas del reloj 90 grados para que la punta de la aguja apunte hacia la derecha. Luego, retira el tacón de aguja.

Después de un equilibrio de 15 minutos, ajuste el nivel de anestesia para obtener una presión arterial media en el rango de 80 a 100 milímetros de mercurio. Luego, realice un análisis de gases en sangre para confirmar que el pH, la presión parcial de dióxido de carbono y la presión parcial de oxígeno están dentro de los parámetros fisiológicos.

A continuación, con una jeringa de 1 mililitro con una aguja roma de calibre 23, extraiga 500 microlitros de sangre del catéter de cola. Para evitar la inyección de aire, llene el espacio muerto de la cámara de la aguja espinal con sangre. Después de ajustar el volumen de sangre en la jeringa a 300 microlitros, conecte la jeringa a la aguja espinal. Luego, agarrando firmemente alrededor de la jeringa, inyecte la sangre manualmente para superar la presión arterial media. Observe un aumento pronunciado de la presión intracerebral y una caída pronunciada simultánea en el flujo sanguíneo cerebral.