Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:59 min. • July 8th, 2025
Comience con células humanas modificadas genéticamente en un medio de crecimiento.
Estas células contienen un sistema inducible por tetraciclina que posee la proteína precursora amiloide o gen APP y un gen de luciferasa.
Intercambiar con un medio que contenga tetraciclina e incubar.
La tetraciclina se une a la proteína activadora, que se une al promotor de APP.
Esto induce la expresión génica y produce las proteínas precursoras que se localizan en la membrana celular.
La enzima β-secretasa escinde la APP, generando un fragmento que permanece adherido a la membrana celular.
La γ-secretasa escinde este fragmento, produciendo péptidos β amiloide y liberando un componente activador.
Este activador ingresa al núcleo, se une al promotor de luciferasa, induce la expresión génica y produce enzimas luciferasas.
Reemplace el medio con un reactivo de ensayo que contenga el sustrato de luciferasa. El sustrato se difunde en las células y reacciona con la luciferasa, produciendo bioluminiscencia.
Utilice un lector de microplacas para medir la intensidad de la luz, que refleja directamente la actividad de la γ-secretasa, una enzima crucial en condiciones neuropatológicas.
Cuente las células NG o
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