Inmunohistoquímica para la identificación de la región del locus coeruleus en secciones de cerebro de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:14 min. • July 8th, 2025
Las regiones del locus coeruleus, ubicadas bilateralmente en el tronco encefálico del ratón, contienen neuronas productoras de norepinefrina y regulan varias regiones del cerebro.
Para detectar estas regiones del locus coeruleus, comience con un portaobjetos de vidrio que lleve las secciones fijas y criopreservadas del tronco encefálico del ratón.
Lave el portaobjetos con un tampón para eliminar los restos de fijador.
Agregue un tampón que contenga detergente e incube para permeabilizar las membranas, luego lave.
Introducir anticuerpos primarios específicos para la enzima dopamina β-hidroxilasa, que convierte la dopamina en norepinefrina, un neurotransmisor.
Incubar para permitir que los anticuerpos interactúen con la dopamina β-hidroxilasa.
Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.
Luego, agregue anticuerpos secundarios acoplados a fluoróforos verdes e incube en la oscuridad.
Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios y luego se lavan.
Agregue medio de montaje a las secciones del cerebro, luego cubra y seque.
Observe los portaobjetos bajo un microscopio de fluorescencia.
La fluorescencia verde que representa las neuronas productoras de norepinefrina marca
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