Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 6:31 min. • July 8th, 2025
Recolecte el tejido de eminencia ganglionar medial, que contiene progenitores interneuronales corticales, de embriones de ratón modificados genéticamente.
Agregue un polímero catiónico y disocie el tejido en una suspensión unicelular.
Agregue vectores lentivirales que lleven un reportero de GFP dependiente de Cre recombinasa flanqueado por sitios lox. Incubar.
El polímero neutraliza las cargas de membrana viral y de la célula huésped, lo que permite la fusión viral y la liberación de ARN.
El ARN viral se transcribe de forma inversa y se integra en el genoma del huésped.
Centrifugar y desechar el sobrenadante. Absorbe el exceso de medios.
Transfiera las células a una superficie hidrofóbica y cárguelas en un dispositivo de inyección.
Inyecte las células en la corteza de un cachorro de ratón anestesiado.
Deja que el cachorro se recupere y crezca.
Los progenitores trasplantados se diferencian en interneuronas maduras en la corteza.
Un subgrupo de estas interneuronas coexpresa Cre recombinasa y RFP.
En estas interneuronas, Cre extirpa los sitios lox, invirtiendo el gen GFP y permitiendo su expresión.
Visualice la coexpresión de RFP y GFP para identificar interneuronas que expresan Cre.
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