Estudio de la transmigración de linfocitos a través de una monocapa de células endoteliales microvasculares

Tome una microplaca con insertos transwell recubiertos con proteínas ECM para promover la adhesión celular.

Agregue células endoteliales microvasculares del cerebro humano, o HBMEC, en los insertos y un medio de crecimiento en los compartimentos inferiores.

Incubar, permitiendo que las células se adhieran y crezcan en una monocapa. Estas células expresan uniones estrechas, imitando el endotelio de la barrera hematoencefálica que limita el paso de células y moléculas.

Retire el medio. Agregue células mononucleares de sangre periférica, o PBMC, a los insertos y un medio de cultivo a los compartimentos inferiores.

Incubar, permitiendo que los linfocitos PBMC interactúen con las células endoteliales y luego pasen entre ellas, un proceso llamado transmigración.

Enjuague el fondo del inserto, recogiendo las células transmigradas adheridas en los compartimentos inferiores.

Introducir microperlas fluorescentes como referencia para la cuantificación celular.

Transfiera la suspensión a un tubo, centrifuge, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender en un cóctel de anticuerpos conjugados con fluoróforo para etiquetar los linfocitos.

Los linfocitos transmigrados están listos para la cuantifi