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Neurociencia
0 vistas • 3:15 min • July 8th, 2025
Tomemos una rata sometida a la oclusión de la arteria cerebral media, que restringe el flujo sanguíneo al hemisferio derecho del cerebro.
La reducción del suministro de sangre priva a las células cerebrales de oxígeno, interrumpe la regulación del agua, causa hinchazón celular o edema y conduce a la interrupción de la barrera hematoencefálica.
Las células dañadas eventualmente mueren, formando una zona de infarto.
Inyecte un tinte azul en la vena de la cola de la rata para detectar la interrupción de la BBB.
Recolecte el cerebro, córtelo con cuchillas de afeitar e incube las rodajas en una solución de tinte redox.
En las células vivas, el tinte reacciona con las deshidrogenasas mitocondriales y sufre una reducción, lo que hace que el tejido viable se vuelva rojo.
Las áreas infartadas, que carecen de actividad deshidrogenasa, permanecen blancas.
Escanee los cortes para obtener imágenes de alta resolución.
Usando un software de análisis de imágenes, aplique un filtro azul para eliminar el color del tinte azul, convirtiendo las imágenes a escala de grises.
Aplique umbrales para distinguir el tejido negro sano del tejido blanco infartado.
Calcule la zona del infarto y el edema cerebral como un porcentaje del hemisferio contralateral no afectado.
Para comenzar, retire el cerebro de rata y corte secciones horizontales de 2 milímetros de espesor con una hoja de afeitar de acero inoxidable sin recubrimiento de 0.009 pulgadas. Coloca las secciones en TTC al 0,005% e incuba durante 30 minutos a 37 grados centígrados. Luego, coloque el tejido cerebral en los portaobjetos del microscopio y realice un escaneo óptico de los seis cortes de cerebro con una resolución de 1,600 por 1,600 DPI. Usa un editor de fotos para agregar un filtro azul a las imágenes.
Después de abrir el software, vaya a Imagen, Ajustes y Mezclador de canales. Seleccione Azul como canal de salida y marque Monocromo. A continuación, haga clic en Aceptar. Guarde la imagen en formato de archivo JPEG. Utilice la herramienta de selección de polígonos en la versión 1.37 de ImageJ para seleccionar cada hemisferio de cada uno de los seis cortes cerebrales y guardarlo como un archivo de imagen separado.
Para calcular el volumen del infarto y el edema cerebral, use una macro para convertir los píxeles de la imagen a blanco o negro según un umbral. Luego, cierre todos los archivos y use una segunda macro para comparar la cantidad de píxeles blancos y negros para determinar el volumen del infarto y el edema cerebral. Copie los datos sin procesar en una hoja de cálculo. Al calcular el volumen del infarto, corrija la hinchazón del tejido utilizando las proporciones de los hemisferios cerebrales ipsilateral y contralateral. Exprese las áreas de edema cerebral como un porcentaje de las áreas estándar del hemisferio contralateral no afectado.