Tinción inmunohistoquímica de fibras nerviosas en el núcleo basal de Meyner del cerebro de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:58 min. • July 8th, 2025
Tome una sección fija del cerebro de ratón que contiene el núcleo basal de Meynert, rico en fibras nerviosas que expresan la enzima colina acetiltransferasa.
La sección se trata previamente para desactivar la peroxidasa endógena.
Agregue un detergente para permeabilizar las membranas celulares, seguido de una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Reemplace la solución con anticuerpos primarios que se unan a la colina acetiltransferasa.
Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos. Incubar con anticuerpos secundarios marcados con biotina, que se unen a los anticuerpos primarios.
Elimine los anticuerpos no unidos y agregue complejos avidina-biotina-peroxidasa, que se unen a los anticuerpos secundarios.
Lavar para eliminar el exceso de complejos.
Agregue un sustrato cromogénico que reaccione con la peroxidasa, formando un precipitado coloreado.
Enjuague con agua destilada para eliminar el exceso de precipitado.
Transfiera la sección a un portaobjetos gelatinizado.
A continuación, deshidrate la sección utilizando concentraciones crecientes de etanol, seguido de xileno.
Monte la sección y observe bajo un microscopio para visualizar las fibra
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