Medición de la absorción de dopamina en sinaptosomas cerebrales de ratón utilizando dopamina radiomarcada
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:01 min. • July 8th, 2025
Cosecha sinaptosomas, estructuras unidas a la membrana derivadas de las terminales presinápticas intactas de las sinapsis neuronales que contienen transportadores de dopamina (DAT), de un cerebro de ratón.
Llene los tubos de ensayo con tampón que contenga ligandos y los tubos de referencia con tampón que contenga ligandos y un inhibidor de DAT.
Agrega los sinaptosomas.
Los ligandos inhiben las enzimas degradadoras de la dopamina y otros transportadores, evitando la degradación de la dopamina y la absorción inespecífica.
Introducir dopamina no marcada y radiomarcada.
En la condición de prueba, el DAT sinaptosómico absorbe la dopamina.
En la condición de referencia, el inhibidor previene la captación de dopamina mediada por DAT, permitiendo solo la captación de fondo.
Agregue las muestras a filtros de microfibra que retienen los sinaptosomas.
Lavar para eliminar la dopamina no unida.
Transfiera los filtros a los tubos de centelleo.
Agregue líquido de centelleo que contenga un compuesto radiosensible.
Coloque los tubos en un mostrador de centelleo.
Las emisiones radiactivas de la dopamina excitan el compuesto para emitir luz, que se mide con el contador.
Reste la referencia de los dat
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