Marcaje de interneuronas llenas de biocitina en rodajas de hipocampo de rata para su visualización

Tome rodajas fijas y permeabilizadas de hipocampo de rata que contengan interneuronas llenas de biocitina con peroxidasas endógenas inactivadas.

Agregue complejos de avidina-biotina (ABC) que contengan peroxidasa de rábano picante (HRP) e incube, permitiendo que la avidina se una a la biocitina.

Lave el ABC sin ligar.

Agregue una mezcla de sustrato cromogénico y potenciador de metales, luego incube.

Introducir peróxido de hidrógeno para activar el HRP, que oxida el sustrato para formar un precipitado oscuro, mientras que el potenciador mejora el contraste.

Transfiera las rodajas al papel de filtro y elimine el exceso de tampón. Tratar con tetróxido de osmio para mejorar el contraste.

Coloque las rodajas en un portaobjetos y móntelos. Deshidratarlos aumentando las concentraciones de etanol.

Lavar las rodajas en etanol absoluto y óxido de propileno.

Agrega resina para infiltrar los tejidos.

Coloca las rodajas en una plancheta y calienta para polimerizar la resina. Transfiera las rodajas a un portaobjetos, coloque un cubreobjetos y solidifique la resina.

Usando microscopía óptica, visualice las interneuronas llenas de biocitina teñidas de oscuro.

Coloque las secciones en un frasco de