Evaluación de la discapacidad motora en modelos de C. elegans mediante el ensayo de locomoción radial

Tome placas de Petri que contengan una distribución uniforme de alimento para gusanos en los medios de crecimiento de nematodos.

Voltea cada plato y marca el centro.

Con un microscopio, introduzca los gusanos Caenorhabditis elegans en el lugar marcado centralmente.

Luego, introduzca gusanos de la misma edad en las placas restantes.

Estos gusanos expresan las formas salvajes o mutantes de una proteína de unión al ARN humana, que forma agregados tóxicos en el citoplasma neuronal y conduce a la muerte neuronal.

Esto reduce la capacidad de los gusanos para controlar los movimientos musculares, lo que resulta en una función motora deteriorada.

Deja que los gusanos se arrastren durante un período determinado.

Con un microscopio, marque la ubicación final de cada gusano.

Mida la distancia radial recorrida por los gusanos desde el punto central hasta sus posiciones finales.

En comparación con los controles, los gusanos que expresan niveles más bajos de la proteína de tipo salvaje muestran un deterioro motor leve, aquellos con niveles más altos de la proteína de tipo salvaje muestran un deterioro moderado y aquellos con la proteína mutante muestran un deterioro grave.

Voltee las placas de ensayo NGM al revés y etiquete la parte inferior con un identificador para las cepas de C. elegans que se van a analizar. Haz un pequeño punto con el marcador en el centro del plato al revés. Mientras trabaja con un microscopio de disección, transfiera los gusanos al centro de la placa de ensayo y configure un temporizador de 30 minutos. Vuelva a colocar la tapa en el plato y déjelo a un lado. Continúe transfiriendo gusanos hasta que todas las cepas estén en las placas de ensayo designadas.

Después de 30 minutos, comience a marcar la primera placa quitando la tapa y colocándola boca abajo bajo el microscopio de disección. Ajuste el enfoque del microscopio hasta que todos los gusanos sean visibles a través del agar. Con un rotulador de diferente color desde el punto central, coloque un pequeño punto en la ubicación de cada gusano.

Revisa el borde de la placa, ya que algunos gusanos pueden terminar allí. Además, cuente y registre cuántos gusanos no se movieron desde el punto central. Mida la distancia desde el punto central hasta las marcas de ubicación final para cada gusano y registre la distancia con una regla. El primer punto de gusano está marcado con un guión. Registre los datos de longitud de cada punto consecutivamente girando la placa en el sentido de las agujas del reloj.