Hibridación in situ mediante sondas de oligonucleótidos para estudiar la expresión de ARN en secciones de cerebro de rata

Tome secciones cerebrales fijas de una rata con síndrome serotoninérgico, lo que conduce a una síntesis alterada de ARN del receptor de serotonina en las neuronas.

Deshidratar el tejido con alcohol. Aplicar una solución de pretratamiento para desactivar las enzimas hidrolizantes endógenas, evitando su interacción con los reactivos de detección.

Tratar con un tampón hirviendo para romper los enlaces cruzados inducidos por la fijación, exponiendo los ARN diana.

Deshidratar el tejido, dibujar una barrera hidrofóbica e incubarlo con una solución para permeabilizar las membranas celulares.

Agregue sondas de oligonucleótidos e incube, lo que permite que las sondas se hibriden con los ARN diana.

Lave para eliminar las sondas no unidas, luego incube con reactivos de amplificación que contengan sondas de preamplificador, amplificador y etiqueta conjugada con enzimas que se unen a las sondas de oligonucleótidos.

Incubar con sustratos cromogénicos que son hidrolizados por las sondas conjugadas con enzimas, produciendo color visible.

Trate con xileno para aumentar la transparencia del tejido, agregue un medio de montaje y aplique un cubreobjetos.

Bajo un microscopio, las manchas de colores en