Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:41 min. • July 8th, 2025
Tomemos un modelo de barrera hematoencefálica in vitro, o BBB, que comprende dos compartimentos separados por una membrana porosa.
El compartimento superior o luminal contiene células endoteliales microvasculares. Estas células expresan uniones estrechas, imitando el endotelio de la barrera hematoencefálica que limita el paso de células y moléculas.
El compartimento inferior o abluminal contiene neuronas, astrocitos y microglía, que representan el parénquima cerebral.
Introducir un virus neurotrópico en el compartimento luminal para simular una infección transmitida por la sangre e incubar.
El virus es endocitado por las células endoteliales, sufre tráfico intracelular dentro de las vesículas y se libera en el lado abluminal.
Después de la incubación, retire la cámara superior. Tome muestras del medio desde el lado abluminal para evaluar la cantidad viral, confirmando el cruce exitoso de la capa endotelial.
Agregue medio fresco e incube nuevamente.
El virus ingresa a las células neuronales a través de la endocitosis, se replica y libera progenie viral.
Cuantificar el aumento de la carga viral extracelular para confirmar la neuroinvasión y replicación viral.
Después de configurar un mini dispositivo cerebral BBB, como se demostró, agregue 3.500 unidades formadoras de placa de la cepa del virus neurotrópico francés del virus de la fiebre amarilla, diluidas en 50 microlitros de medio de células endoteliales FBS al 2% con mucho cuidado en la parte superior del compartimento luminal. Inocular el mini cerebro BBB de control con 50 microlitros de medio de células endoteliales FBS al 2% sin virus. Luego, coloque el mini dispositivo cerebral BBB expuesto al virus en la incubadora durante 24 horas.
Al día siguiente, retire los insertos para determinar la permeabilidad de las células endoteliales en un pocillo complementario, como se acaba de demostrar, y guarde 1 mililitro de muestra de cada pocillo para determinar el título del virus en el compartimento abluminal.
Debajo del inserto suavemente para evitar fugas del compartimento luminal en el compartimento abluminal.